Мелихова Елена Владимировна, кандидат химических наук, доцент, доцент кафедры химии
ул. Московская 30, г. Липецк 398055
Elena V. Melikhova, Cand. of Sci. (Chemistry), Associate Professor, Associate Professor of the Department of Chemistry
Moskovskaya Str., Lipetsk 398055
Егоров Геннадий Александрович, инженер
ул. Московская 30, г. Липецк 398055
Gennady A. Egorov, Engineer
Moskovskaya Str., Lipetsk 398055
Лазуткина Елизавета Игоревна, студент
ул. Московская 30, г. Липецк 398055
Elizaveta I. Lazutkina, Student
Moskovskaya Str., Lipetsk 398055
Елфимова Александра Викторовна, студент
ул. Московская 30, г. Липецк 398055
Alexandra V. Yelfimova, Student of the Department of Chemistry
Moskovskaya Str., Lipetsk 398055
Цель исследования – оценка возможности применения лекарственного препарата фолиевой кислоты в качестве стандартного образца и выбор условий определения фолиевой кислоты спектрофотометрическим, флуориметрическим и хроматографическим методами анализа с наилучшими метрологическими показателями.
Методы. Для спектрофотометрических измерений использовали двухлучевой сканирующий спектрофотометр UV-1800 Shimadzu (Япония), для оценки флуоресценции – анализатор жидкости «Флюорат-02-Панорама» (Россия), для хроматографических исследований – жидкостной хроматограф LC-20AD фирмы Shimadzu (Япония), оснащенный спектрофотометрическим детектором SPD-M20A и колонкой Nucleosil С18 (октадецил), размером 25 x 4,6 мм, фирмы Supelcosil. Методика спектрофотометрического определения фолиевой кислоты основана на реакции получения азокрасителя с устойчивой фиолетовой окраской, интенсивность которой пропорциональна содержанию аналита. Методика флуориметрического определения фолиевой кислоты базируется на окислении аналита перманганатом калия, в результате чего образуются продукты реакции, обладающие флуоресценцией. В основу хроматографического анализа положена прямопропорциональная зависимость площади пика и концентрации фолиевой кислоты.
Результаты. В работе изучено влияние природы и рН четырех буферных растворов на степень извлечения фолиевой кислоты из лекарственных форм. Наиболее полное извлечение аналита (R = 96,83%) зафиксировано в случае применения фосфатного буферного раствора с рН 6,8. Предложен флуориметрический способ определения фолиевой кислоты с большей в сравнении с гостированными методиками чувствительностью, предел обнаружения составил 0,02 мкг/мл. За счет разрыва концентрационного диапазона аналита чувствительность колориметрического метода увеличена и предел обнаружения снижен до 0,13 мкг/мл. Разработана хроматографическая методика определения фолиевой кислоты с линейным диапазоном 0,1–10 мкг/мл и пределом обнаружения 0,1 мкг/мл.
Заключение. Предложенные методики определения фолиевой кислоты апробированы при анализе образцов коровьего молока и белой фасоли. Использование теста Фишера и модифицированного теста Стьюдента показало отсутствие систематической ошибки.
Purpose. The aim of the work was to assess the possibility to use a folic acid drug as a standard sample and to choose the conditions of determination of folic acid by spectrophotometric, fluorimetric and chromatographic methods of analysis with the best metrological parameters.
Methods. For spectrophotometric measurements we used a two-beam scanning spectrophotometer UV-1800 Shimadzu (Japan), for evaluation of fluorescence - liquid analyzer "Fluorat-02-Panorama" (Russia), For chromatographic studies - liquid chromatograph LC-20AD from Shimadzu (Japan), equipped with a spectrophotometric detector SPDM20A and a column Nucleosil C18 (octadecyl), size 25 x 4,6 mm, firm Supelcosil. The method of spectrophotometric determination of folic acid is based on the reaction of obtaining an azo dye with a steady violet color, the intensity of which is proportional to the content of the analyte. The fluorimetric determination of folic acid is based on the oxidation of the analyte with potassium permanganate, which produces reaction products with fluorescence. Chromatographic analysis is based on a directly proportional relationship between peak area and folic acid concentration.
Results. In this work we studied the influence of the nature and pH of four buffer solutions on the degree of extraction of folic acid from dosage forms. The most complete extraction of the analyte (R = 96.83%) was detected in case of using phosphate buffer solution with pH 6.8. A fluorimetric method of determination of folic acid with higher sensitivity as compared to the state methods was proposed, the detection limit was 0.02 µg/ml. Due to a break in the concentration range of the analyte, the sensitivity of the colorimetric method was increased, the detection limit was reduced to 0.13 µg/ml. A chromatographic method of folic acid determination with a linear range of 0.1 - 10 µg/ml, and a detection limit of 0.1 µg/ml were developed.
Conclusion. The proposed methods for determining folic acid have been validated in the analysis of samples of cow's milk and white beans. The use of Fisher's test and a modified Student's test showed the absence of systematic error.
The authors declare that there are no conflicts of interest present.